Набор реагентов для иммуноферментного количественного определения С1-ингибитора человека (С1-inh PS)
С1-ингибитор (С1-INH), также известный как ингибитор эстеразы C1, кодируется геном SERPING1, принадлежит суперсемейству ингибиторов сериновых протеаз (серпинов), представляет собой одноцепочечный высокогликозилированный белок, состоящий из 478 аминокислотных остатков и характеризующийся, по данным электрофореза в невосстанавливающих условиях.
Основная функция С1-INH заключается в ингибировании классического каскада комплемента для подавления спонтанной активации путем образования неактивного комплекса с протеазами C1r и C1s. Кроме того, он инактивирует протеазы фибринолитического, свертывающего и кининового путей и предотвращает неконтролируемую продукцию брадикинина.
С1-INH постоянно циркулирует в кровотоке в диапазоне концентраций в норме от 200 до 400 мкг/мл (20-40 мг/л), однако, его уровни могут выходить за эти рамки в период воспаления и в зависимости от болезней.
Дефицит ингибитора С1 проявляется в виде ангионевротического отека (АО), который часто возникает на фоне крапивницы различной этиологии или избыточного потребления комплемента при лимфопролиферативных заболеваниях (например, при В-лимфомах), иммунокомплексных расстройствах, а также вследствие наследственного дефекта генов, ответственных за биосинтез этого белка или за счет образования аутоантител к С1-ингибитору при аутоиммунных нарушениях.
Наиболее тяжелым проявлением АО является наследственный ангионевротический отек (НАО), который может возникнуть на фоне крапивницы и без нее и характеризуется повторными, самоограничивающимися обострениями, которые не купируются антигистаминными препаратами.
НАО является заболеванием, возникающим вследствие доминантной мутации в аутосоме человека, что приводит к генетически детерминированным дефектам генов, кодирующих синтез С1-INH. Клинически он проявляется рецидивирующими отеками кожи и слизистых оболочек дыхательных путей, желудочно-кишечного тракта и мочеполовой системы. Наиболее опасны приступы НАО с локализацией отека в области гортани, что может привес¬ти к сдавлению дыхательных путей, а также летальному исходу вследствие удушья. Отеки органов брюшной полости сопровождаются сильной, мучительной болью, рвотой и диа¬реей, что имитирует картину острого живота, и являются причиной выполнения ненужных оперативных вмешательств. Как правило, заболевание начинает проявляться в раннем детстве или подростковом возрасте. Приступы возникают с разной периодичностью – от нескольких раз в год до нескольких раз в месяц. Предсказать их практически невозможно.
Симптоматика проявления АО является сходной, что вызывает у клиницистов трудности при определении причины его вызывающей, установлении правильного диагноза и выбора курса терапии.
НАО строго связывают именно с дефицитом С1-INH, причем, по результатам определения общего содержания C1-ингибитора и количества функционально активного C1-ингибитора в образцах сыворотки крови пациентов, его разделяют на три типа.
У 85 % больных концентрация C1-INH в крови составляет всего 10–30 % от нормы (НАО I типа).
15 % больных НАО имеют нормальную или повышенную концентрацию C1-inh в крови.
Описан так же НАО с нормальным C1-inh, обозначаемый как НАО III типа (НАО-nlC1INH), который остается малоизученным. Клинические симптомы НАО III типа неотличимы от НАО типа I и II. Однако пациенты с НАО III имеют нормальные уровни функционального C1-inh в плазме.
Распространенность НАО, по опубликованным в литературе данным, колеблется от 1:50 000 до 1:100 000. В России регистр таких больных появился сравнительно недавно, в 2017 году, и на сегодняшний день в нем значится более 300 человек. При этом специалисты полагают, что из-за сложности диагностирования этого заболевания пациентов с наследственным ангиоотеком в стране может быть втрое больше. Приблизительный средний возраст, когда больному поставлен диагноз, составляет в России 27 лет. Поскольку это генетическое заболевание, при диагностике следует иметь в виду, что оно может наблюдаться у кого-то из членов семьи.
Являясь хроническим и изнурительным заболеванием, все три типа НАО создают тяжелое бремя болезни, вызывают депрессию и тревогу. Кроме того, в связи с тем, что НАО остается плохо изученным заболеванием, существует вероятность постановки неправильного он часто неправильно диагноза. Некорректная диагностика или ее несвоевременное проведение могут привести к неадекватному и неэффективному лечению, ненужным (и потенциально усугубляющим заболевание) диагностическим операциям, что может привести к летальному исходу. Особенно важно своевременное проведение терапии пациентам с приступом отека гортани. В специально проведенных исследованиях выявлено 29% случаев смертности у не диагностированных пациентов с НАО по сравнению с 3% у пациентов с установленным соответствующим диагнозом.
Установлено, что механизм проявления болезни НАО связан с тем, что при нарушении количества или функциональной активности C1-INH, циркулирующие в крови калликреин-кининовая система и связанная с ней система фибринолиза уходят из-под контроля, что приводит к накоплению в плазме, вазоактивного нонапептида брадикинина, который отвечает за повышение сосудистой проницаемости и приводит к отеку органов. Хотя НАО является брадикинин-опосредованным заболеванием, для диагностики традиционно используется определение сначала общего количества C1-INH и дополнительно оценка уровня его функциональной активности.
Профессиональным иммунологам-аллергологам часто приходится общаться с пациентами, у которых заболевание не могли выявить на протяжении многих лет. Разные специалисты диагностировали у больных аллергию, астму, ревматологические заболевания, острые воспаления внутренних органов. В результате они получали неэффективную терапию, в частности антигистаминными препаратами, которые не приносили облегчения и не снижали частоту появления отеков. Нередки случаи, когда пациенты при острых болях живота подвергались необоснованным хирургическим вмешательствам. Таким образом, точная и своевременная диагностика НАО имеет решающее значение для обеспечения возможности получения пациентами необходимого лечения, что позволяет контролировать болезнь надлежащим образом.
В настоящее время в мировой практике используется несколько методов лечения НАО. Для профилактики НАО практикуется применение растворимых андрогенов, которые стимулируют биосинтез С1-ингибитора (даназол, станозолол). Для купирования острых приступов применяются препараты в виде концентратов очищенного из плазмы крови С1-inh под торговыми названиями «Berinert», «Cetor», «Cinryze», а также синтетические ингибиторы и блокаторы брадикинина: синтерические экаллантид («Kalbitor»), икатибант («Firazyr»), а также гуманизированное антитело ланаделумаб («Такзайро»). Применяемые препараты являются дорогостоящими, поэтому их назначение должно быть хорошо обосновано установлением правильного диагноза.
Диагностика НАО в клинических центрах России в настоящее время ограничена с одной стороны отсутствием отечественных тест систем, а с другой – отсутствием легко доступных импортных тест систем. В мировой практике используются различные методы количественного определения С1-inh, включая автоматизированный турбидиметрический анализ, радиальную иммунодиффузию, иммуноферментный анализ с использованием дорогостоящих анализаторов, а также исключительно импортных реагентов.
Поскольку наиболее важным показателем для постановки диагноза НАО является определение его тотального количества в сыворотке крови в НИИ эпидемиологии и микробиологии им Пастера разработан «Набор реагентов для иммуноферментного количественного определения С1-ингибитора человека» (ИФА С1-inh PS). ИФА выполняется в традиционном варианте «Сэндвич» с использованием пары собственных моноклональных антител, не требует применения дорогостоящего оборудования, и служит вспомогательным средством диагностики НАО у пациентов с ангиоотеками различного генеза.
Клинические исследования «С1-inh PS», проведенные в ФГБУ «НМИЦ им. В.А. Алмазова» Минздрава России успешно завершены и показали 100 процентное совпадения с результатами референтного импортного медицинского изделия «C1 Esterase Inhibitor». Таким образом, установлено, что медицинское изделие «Набор реагентов для иммуноферментного количественного определения С1-ингибитора человека (С1-inh PS)» производства Федерального бюджетного учреждения науки «Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Пастера» Роспотребнадзора (197101, Санкт-Петербург, ул. Мира, д.14) соответствует требованиям нормативной документации, технической и эксплуатационной документации производителя и может быть рекомендовано для широкого применения в диагностической практике и для регистрации в Росздравнадзоре, как изделие медицинского назначения.
